硫化氢信号分子与L-乳酸脱氢酶蛋白相互作用机制的研究
Investigation of Interaction Mechanism Between Signaling Molecule Hydrogen Sulfide and L-Lactic Dehydrogenase
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文摘
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硫化氢( H_2S)作为信号分子与目标蛋白相互作用而实现信号传导机制的研究一直是研究热点。本研究以L-乳酸脱氢酶为目标蛋白,选用3种H_2S供体试剂( NaHS、Na_2S、PS) ,采用分子荧光实时监测L-乳酸脱氢酶活性变化,研究H_2S与目标蛋白的相互作用。SDS-PAGE电泳结果显示,H_2S不是通过形成二硫键/三硫键的方式与L-乳酸脱氢酶蛋白相互作用;圆二色谱结果表明,L-乳酸脱氢酶的二级结构发生变化,提示H_2S可能存在半胱氨酸巯基衍生能力,以硫烷硫存在的PS具有最强的巯基作用力; MALDI-TOF-MS /MS分析结果表明,L-乳酸脱氢酶蛋白中部分半胱氨酸巯基位点发生了硫烷化,进一步揭示了H_2S是通过与活性半胱氨酸巯基位点硫烷化的方式与L-乳酸脱氢酶发生作用。 |
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其他语种文摘
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Molecular mechanisms whereby H_2S influences its targets have been of intriguing interest. In this work,L-lactic dehydrogenase ( L-LDH) was used as the protein target,and three kinds of H_2S-donor reagents ( NaHS,Na_2S,and polysulfide) were chosen. The interactions of these H_2S-donor reagents with L-LDH were disclosed by molecular fluorescent assays for real-time monitoring of L-LDH activity. The results of the SDSPAGE showed that H_2S might not interact with L-LDH to form disulfide /trisulfide bonding. Circular dichroism spectra assays revealed that H_2S reagents could be likely to react with cysteine thiols to yield sulfurated thiol ( -SSH) derivatives in L-LDH,and sulfur-containing PS ( polysulfide) was a stronger protein S-sulfurating agent than the other two sulfides. Matrix assisted laser desorptionionization time-of-flight tandem mass spectrometry ( MALDI-TOF-MS /MS) study showed partial S-sulfuration of the active cysteine sites existed in L-LDH. In conclusion,H_2S exerts its biological effects as a gasotransmitter through its reactions with cysteine thiols in proteins by S-sulfuration. |
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来源
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分析化学
,2018,46(7):1145-1151 【核心库】
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DOI
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10.11895/j.issn.0253-3820.171510
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关键词
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硫化氢
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L-乳酸脱氢酶
;
半胱氨酸巯基
;
硫烷化
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地址
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1.
沈阳农业大学食品学院, 沈阳, 110866
2.
沈阳师范大学美术与设计学院, 沈阳, 110034
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语种
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中文 |
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文献类型
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研究性论文 |
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ISSN
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0253-3820 |
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学科
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化学 |
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基金
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国家自然科学基金项目
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十三五重点研发专项
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文献收藏号
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CSCD:6284574
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参考文献 共
18
共1页
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